Ularni sotgan deyarli barcha kompaniyalar mavjudbromelin fermenti kukunipapain bilan aralashtiriladi.Bromelinni 5000GDU/g gacha tozalash qiyin. lekin papani 1000,000GDU/g gacha tozalash juda oson. hatto 2000 000GDU/g gacha. ammo bromelinning vazifalari papadan farq qiladi. rangi, hidi, suvda eruvchanligi va ta'mi soxta mahsulot va haqiqiy mahsulotdan farq qiladi. Ularning farqi shundaki, to'g'ri bromelin fermenti kukuni kulrang, hidsiz, ta'msiz va suvda erimaydi.
Ammo soxta bromelin quyidagi xususiyatlarga ega:
● Ochiq-sariq, aromatik va yumshoq shirin va suvda eriydi. Bu papaning o'ziga xos xususiyati.
● Yallig'lanishni kamaytirish va og'riqni yo'qotish uchun ishlatiladi. ammo papada bu funktsiyalar deyarli yo'q.
● U oziq-ovqat qo'shimchasi sifatida emas, balki faqat oziq-ovqat qo'shimchasi sifatida ishlatiladi, lekin haqiqatan ham farmatsevtika darajasida bo'lishi mumkin. Ammo papain faqat go'shtni yumshatuvchi kukun va kosmetika sifatida ishlatiladi.
Biz bromelinni SDS-PAGE geli va JELATIN DIGESTION UNIT ANALYTICAL va HPLC usullari bo'yicha sinovdan o'tkazdik, soxta mahsulot uchun SDS-PAGE gel usulida maqsadli molekulalar kamroq.
Quyida SDS Page elektroforez natijalari keltirilgan
Yuqoridagi dog'lar shuni ko'rsatadiki, faqat to'g'ri mahsulot rasmning to'g'ri joyida bir xil dog'ga ega, ammo soxta mahsulotda ozgina dog'lar bor, ya'ni molekulyar og'irlik deyarli ko'rinmaydi.
Bromelinning molekulyar og'irligi taxminan 33000 ni tashkil qiladi, ammo papainning molekulyar og'irligi 21000 ga teng. HPLC kromatogrammasi:
Siz faqat to'g'ri ekstrakt bromelinning to'g'ri molekulyar og'irliklarini o'z ichiga olganligini va HPLC tomonidan aniqlanishini ko'rasiz.
Ammo agar biz faqat Jelatin hazm qilish birligining tahliliy usuli (GDU) tomonidan sinovdan o'tgan bo'lsak, II ilovaga qarang. To'g'ri va noto'g'ri mahsulot quyidagi kabi bir xil natijalarga ega:
Ananas poyasi juda arzon va poyadan bromelingacha bo'lgan stavka juda past, ishlab chiqarish jarayonida ba'zi ifloslanishlar mavjud.
Bromelin fermenti kukuni zavodining deyarli barchasi yaqin joyda joylashgan. Ular yangi poyadan foydalanadilar. Poyani uzoq masofaga jo'natish mumkin emas. Xom ashyoni daladan yig'ib olingandan so'ng iloji boricha tezroq qayta ishlash kerak yoki oqsil parchalanishiga yo'l qo'ymaslik uchun past haroratli muhitda (4-8 daraja) saqlanishi kerak. Haqiqiy hayotda ishlab chiqaruvchi yuqoridagi ikkita shartning birortasiga ham javob bera olmaydi, chunki ananas poyalari juda ko'p. Oqilona usul - ishlov berish vaqti va oqsil faolligini yo'qotish o'rtasidagi muvozanat. Odatda, ananas yig'im-terim mavsumida xom ashyoni ishlab chiqarish va xom ashyoni past haroratli muhitda saqlash (4-8 daraja).
Biz SDS Page elektroforezi boʻyicha test oʻtkazmoqdamiz, nazariy jihatdan uni 10,000 yoki 20,000 ga oshirishimiz mumkin. lekin bu juda qimmatga tushadi. 5000GDU/g va uni barqaror holatga keltiring, ehtimol malto tayanchida/mikrokapsullangan bir yoki biror narsa, shuningdek, organik navli ekstraksiya/tozalash.
Ilova I
● 5-usul SDS poliakrilamid gel elektroforezi (SDS-PAGE)
SDS-PAGE denatüratsiyalangan poliakrilamid gel elektroforez usuli hisoblanadi. Ushbu usulda oqsillarni ajratish printsipi ko'pchilik oqsillarning anion sirt faol moddasi natriy dodesil sulfat (SDS) bilan og'irlik nisbatida kompleks hosil qilish uchun birlashishi mumkinligiga asoslanadi.
Protein molekulalari tomonidan olib boriladigan manfiy zaryad tabiiy oqsil molekulalarining aniq zaryadidan ancha yuqori bo'lib, turli protein molekulalarining zaryad ta'sirini yo'q qiladi va oqsillarni molekulyar hajmiga qarab ajratadi.
Bu usul oqsillarni sifat jihatidan aniqlash, tozalik va nopoklikni nazorat qilish, miqdoriy aniqlash uchun ishlatiladi.
1 asboblar qurilmasi
Ruxsat etilgan kuchlanish yoki doimiy oqim quvvat manbai, vertikal plastinka elektroforez tanki va yopishtiruvchi qolip.
2. Reaktivlar
(1) Suv.
(2) Ajratish jeli buferi (4x, A eritmasi) 1,5mol/L trihidroksimetil aminometan xlorid kislota buferi. 18,15 g trigidroksimetil aminometanni torting va kerakli miqdorda suv bilan eritib oling. Xlorid kislotasi bilan pH qiymatini 88 ga sozlang va suv bilan 100 ml ga suyultiring.
(3) 58.0g akrilamid va 20g N, N '- metilenbisakrilamidni 30 foizli akrilamid eritmasida (B eritmasi) torting, iliq suvda eritib, 200 ml ga suyultiriladi, filtr qog'ozi bilan filtrlanadi (qog'ozda saqlanadi). qorong'i).
(4) 10 g natriy dodesil sulfatni 10 foizli SDS eritmasida (C eritmasi) torting, suvda eritib oling va 100 ml gacha suyultiring.
(5) Tetrametiletilendiamin eritmasining tijorat reaktivi (TEMED, D eritmasi).
10% ammoniy persulfat eritmasi (E eritmasi) 10 g ammoniy persulfatni torting, suvda eriydi va 100 ml gacha suyultiriladi. Uni ishlatishdan oldin tayyorlash yoki alohida -20 darajada 2 hafta davomida saqlash tavsiya etiladi.
(7) Konsentrlangan kauchuk bufer (4 ×, F eritmasi) 0.5mol/L Trihidroksimetilaminometan Hidroklorik kislota buferi, 6,05 g Trihidroksimetilaminometanni torting, eritish uchun tegishli miqdorda suv qo'shing, pH qiymatini gidroxlorid bilan 6,8 ga sozlang. kislota solib, suv bilan 100 ml gacha suyultiriladi.
(8) Elektrod buferi (10 ×) 30 g trimetilaminometan, 144 g glitsin va 10 g natriy dodesil sulfatni torting, ularni suvda eritib, taxminan 800 ml ga suyultiring. Xlorid kislotasi bilan pH qiymatini 8.1-8.8 ga sozlang va suv bilan 1000 ml gacha suyultiring.
(9) Kichraytirilmagan namuna buferi (4 ×) 303g trimetilaminometan, 20mg bromofenol koʻk va 8,0g natriy dodesil sulfatni torting, 40ml glitserinni oʻlchab, suvda eritib, taxminan 80ml gacha suyultiriladi. Xlorid kislotasi bilan pH ni 68 ga sozlang va suv bilan 100 ml ga suyultiring.
(8) Elektrod buferi (10 ×) 30 g trimetilaminometan, 144 g glitsin va 10 g natriy dodesil sulfatni torting, suvda eritib, taxminan 800 ml gacha suyultiriladi. DH qiymatini xlorid kislota bilan 81-88 ga sozlang va suv bilan 1000 ml ga suyultiring.
(9) Kichraytirilmagan namuna buferi (4 ×) 3,03 g trimetilaminometan, 20 mg bromofenol ko'k va 80 g natriy dodesil sulfatni torting, 40 ml glitserinni o'lchab, suvda eritib, taxminan 80 ml gacha suyultiring. Xlorid kislotasi bilan pH ni 6,8 ga sozlang va suv bilan 100 ml ga suyultiring.
(10) Qaytarilgan sinov moddasi buferi (4 ×) 3,03 g trimetilaminometan, 20 mg bromofenol ko‘k va 80 g natriy dodesil sulfatni torting, 40 ml glitserinni o‘lchab, 80 ml gacha suv bilan eritib, suyultiring va qo‘shing. - 20ml merkaptoetanol, pH ni xlorid kislota bilan 6,8 ga sozlang, suv bilan 100 ml (yoki 3,03 g trimetilaminometan, 20 mg bromofenol ko‘k, 8,0 g natriy dodesil sulfat) suyultiring, 40 ml glitserinni o‘lchab, suvda eritib yuboring. 80 ml gacha, pH ni xlorid kislota bilan 6,8 ga sozlang, 100 ml suv bilan suyultiring va ishlatishdan oldin ditiotreitolni 100 mmol / L ga qo'shing).
● II-ilova
Jelatin hazm qilish birligining analitik usuli (GDU)
A. Maqsad: Ushbu protsedura Bromelain fermenti kukunining proteolitik faolligini aniqlash uchun ishlatiladi.
B. Uskunalar:
1. pH o'lchagich
2. Doimiy haroratli suv hammomi 45.0 daraja ± 0.1 daraja
3. Analitik balans
4. Volumetrik kolbalar
5. Volumetrik pipetkalar
6. Taymer
7. Raqamli byuretka (aniqligi 0,1 ml)
8. Tutunni o'chirish uchun qopqoq
9. Avtomatik pipetkalar
C. Xavfsizlik choralari:
Ushbu sinov tutun qopqog'ida bajarilishi kerak.
1. Standart laboratoriya xavfsizligi amaliyotlaridan foydalaning.
2. Formaldegid: tayyorlang va har doim tutun qopqog'ida saqlang. Kantserogen va teratogen ma'lum.
3. Peroksid: Kuchli oksidlovchi
D. Reaktivlar va reagentlar:
1. Distillangan suv: taxminan 500 ml: 0,1 N HCI bilan pH ni 4,5 ga sozlang.
2. Jelatinli substrat:
a. 25 gramm jelatinni (Mikrobiologie. 1.04070) 375 ml issiq suvda eritib, qaynatib oling. 45 darajaga qadar sovutib oling.
b. 0,1 n HCI bilan pH ni 4,5 ga sozlang va 500 ml pH 4,5 distillangan suvgacha suyultiring.
c. Jelatin substratini 45 daraja haroratda saqlang.
3. Bufer yechimi:
a. 150ml stakandagi 40-50 ml suvga asta-sekin 15 g NaCl qo'shing va eritish uchun aralashtiring.
b. 0.570 ml sirka kislota qo'shing.
c. 0.2N HCL bilan pH ni 4,5 ga sozlang (hajmi 100 ml dan katta bo'ladi.)
4. 3 foiz vodorod periks:
a. 2,5 ml 30 foizli vodorod periksni (stok eritmasi) pipetka bilan 25 ml hajmli o‘lchov kolbasiga soling va pH 4,5 distillangan suv bilan hajmgacha suyultiring.
5. 37 foiz formaldegid pH 9.0: a. Etarli hajmdagi (1{6}}0 ml) formaldegidni 0,1 N NaOH bilan pH 9,0 ga sozlang (pHni sozlashdan oldin har bir namunaga taxminan 20 ml formaldegid).
Jelatin hazm qilish birligining analitik usuli (GDU) - davomi.
6. 0.100 N NaOH: (Standartlashtirilgan xarid qilingan) a. Stok eritmasi: 0,100 N da standartlashtirilgan
E. Jarayon:
1. Fermentni tayyorlash:
a. Ferment tayyorlashni hisoblash
Og'irligi {0}}/Maqsadli faollik (taxminan 0,05 g yoki 50 mg)
A. Fermentni 50 ml hajmli o'lchov kolbasiga aniq torting
B. 8,3 ml bufer eritma qo'shing.
b. Xona haroratida 30 daqiqa tursin.
C. pH 4,5 distillangan suv yordamida 50 ml gacha suyultiring, kichik aralashtirgich qo'shing va yana 10-15 daqiqa davomida aralashtiring.
2. Ferment jarayoni:
a. 25 ml jelatin substratini aralashtirgichlar bo'lgan ikkita 100 ml stakanning har biriga pipetka bilan soling va ularni 45 daraja haroratda 5 daqiqa davomida suv hammomiga joylashtiring, biri sinov eritmasi uchun, ikkinchisi esa bo'sh eritma uchun.
b. Sinov yechimi:
1) Sinov eritmasi uchun moʻljallangan stakanga 1.0 ml bromelin fermenti kukuni eritmasidan soling, vaqtni belgilang va aylantiring.
2) 45 daraja inkubatsiyadan roppa-rosa 20 daqiqa o'tgach, 0,1 ml 3 foizli vodorod periks qo'shing va aylantiring.
3) Yana 5 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.
4) Stakanni suv hammomidan chiqarib oling va doimiy aralashtirish bilan pH probini joylashtiring.
5) 10 soniyadan keyin pHni yozib oling (Boshlang'ich pH)
6) 0,1 N NaOH bilan pH 6.0 ga sozlang. (Taxminan 2-4 ml)
*Eslatma: pH ni 6 ga moslashtirganda.0 pH 5,8 da ehtiyot bo'ling; pH asta-sekin o'sib boradi va bu nuqtada NaOH ning daqiqali qo'shilishi pHni sezilarli darajada oshiradi.
7) Doimiy aralashtirishda 10 ml 37% pH 9,0 formaldegid qo'shing.
8) 10 soniya va 1 daqiqadan so'ng pH ni yozib oling.
9) pH 9.0 gacha 0,1 n NaOH bilan titrlang.
10) Titrlash hajmini yozib oling.
Bu test titri, T. c.
Blank Solution: Blank Solution test yechimi bilan bir vaqtda ishga tushirilishi kerak. Bu sinov eritmasi ishga tushirilgandan 12 daqiqa o'tgach, bo'sh eritmani aniqlashni boshlash orqali amalga oshiriladi. Bu sizga Blank Solution bilan davom etishdan oldin Test eritmasida tahlilni yakunlash uchun vaqt beradi. 1) Bo'sh eritma uchun mo'ljallangan stakanga 0,1 ml 3 foizli vodorod periks qo'shing va aylantiring.
2) 45 gradusda roppa-rosa 2{4}} daqiqa inkubatsiyadan so'ng 1,0 ml bromelin eritmasi qo'shing va aylantiring.
3) Yana 5 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.
JELATIN HAZIR BERISH BIRLIKLARINI ANALITIK USULI (GDU) - davomi.
4) Stakanni suv hammomidan chiqarib oling va doimiy aralashtirish bilan pH probini joylashtiring.
5) 10 soniyadan keyin pHni yozib oling (Boshlang'ich pH)
6) 0,1 N NaOH bilan pH 6.0 ga sozlang. (Taxminan 2-4 ml)*Yuqoridagi eslatmaga qarang.
7) Doimiy aralashtirishda 10 ml 37% pH 9,0 formaldegid qo'shing.
8) 10 soniya va 1 daqiqadan so'ng pH ni yozib oling.
9) pH 9.0 gacha 0,1 n NaOH bilan titrlang.
10) Titrlash hajmini yozib oling. Bu bo'sh titr, B.
F. Hisoblash:
1. Ta'rif: Bitta jelatin hazm qilish birligi - bu 20 daqiqadan so'ng 45 daraja haroratda hazm bo'lgandan so'ng, pH 4,5 yoki pH 5,5 (GDU pH 4,5 yoki pH 5,5) da standart jelatin eritmasidan 1 mg aminokisotni ajratadigan ferment miqdori.
GDU/g {0}} (TB) x 14 x N x 50 Vt (g) Bu erda: T=Sinov titri (ml 0,1 N NaOH) B=Bo'sh titr (ml 0,1 N NaOH) N=Standartlashtirilgan NaOH normalligi (ya'ni 0,100) Vt (g)=Fermentning boshlang'ich og'irligi
G. Sinov parametrlari:
1. Ferment preparatlari taxminan 0,001 g/ml (1 mg/ml) konsentratsiyaga suyultiriladi yoki bromelin fermenti kukuni konsentrati uchun taxminan 1-2 GDU/ml. Usulning to'g'riligini ta'minlash uchun har bir ishda mos yozuvlar materiali tekshiriladi.
Guanjie, GDU sinov usulidan foydalangan holda, ommaviy bromelin kukunini taqdim etadi. Bizning ishlab chiqarish jarayoni CGMP standarti ustaxonalari ostida ishlaydi, ikkita zavod va ikkita mustaqil laboratoriya bo'ylab uchta ishlab chiqarish liniyasidan foydalanadi. Mahsulotlarimiz bilan bog'liq har qanday savollar uchun biz bilan bog'laninginfo@gybiotech.com.
